Pitanja za brtvljenje i kontaminaciju u multiwell Cell Culture Ploče

Učitavanje i rukovanje višenamjenskim pločicama kulturne ploče:

Ploča kulture ćelije takođe prati princip stroge asepse tokom obavljanja ćelijskih operacija. Sve operacije moraju biti standardizirane i naučne, a neće uzrokovati dodatni utjecaj na rast ćelija. Najčešći problem je kako osigurati uniformnost ćelija nakon dodavanja uzorka i minimiziranje utjecaja promjene medija na stanje rasta ćelija.

Pitajte:
Poklopi od 96 i 24-dobro kulturne ploče ili petrije su vrlo labave, što je pogodno za ventilaciju, ali će se bakterije, kalup i drugi zagađivati ​​ući u njih?

Odgovor:
Poklopac je vrlo labav, koji pripada poluotvorenoj kulturi, a svrha toga je prozračiti (u stvari je da CO2 izvrši izvan kulturnog jela u potpunosti s jelovom kulture i održavaju pH vrijednost kulture srednja).
Sve ima prednosti i nedostatke, što naravno povećava mogućnost zagađenja. Pored toga, to uzrokuje da tečnost u jelu isparava, što je zapaženo za precizno doziranje lijekova. Stoga su potrebne sljedeće dvije mjere: a. Zrak u inkubatoru mora biti čist (redovno ultraljubičasto svjetlo, ribanje alkohola i inkubator treba otvoriti i zatvoriti što je manje moguće) b. Vlažnost u inkubatoru uvijek se mora čuvati na 100% (sudoper sa sterilnom destiliranom vodom stavljen u inkubator).
Baš kao i petrijsko jelo, nalazi se i spremnik sa naopakog poklopca, a neće biti zagađen. Uglavnom zbog negativnog pritiska protoka zraka koji se generira "L" rubom poklopca, postoje mikroorganizmi pričvršćeni na prašinu, a prašina koja prevozi protok zraka ne može proći kroz ivicu poklopca koji stvara negativan pritisak. Učinak ventilacije je samo kroz difuziju zraka, a neće se generirati protok zraka, tako da će samo disati i ne prodrijeti u bakterije.

Pitajte:
Pomoću ploče sa 24 i bunar, postoje operacije u nekim od bunara (u ultra čistu klupu), a u drugim bunarima ima ćelije. Brinem se da će to izazvati kontaminaciju. Ne znam na šta da obratim pažnju?

Odgovor:
Ako je operacija standardizirana u ultra čistu klupu, to bi trebalo biti u redu. Mislim da možete izvršiti potpunu upotrebu poklopca kulturne ploče, pokušajte izložiti samo rupe koje će se upravljati i pokriti ostale rupe s poklopcima.
Razmislite o sveobuhvatno prije upotrebe i u potpunosti iskoristite sve rupe; Ako trebate samo koristiti nekoliko rupa, možete koristiti samo jednu stranu i ostatak prekriti poklopcem. Navikao sam prvo da koristim pravu rupu (prikladno je dodati uzorke u desnu ruku).

Prilikom rada koristite nekoliko staklenih dijapozitiva za podizanje jedne strane ploče, nemojte potpuno otvoriti poklopac, uglavnom nema problema.
Neravnomjerna distribucija i rješenja ćelije

Pitajte:
Ćelije se inokuliraju na pločici kulture, a ćelije se uvijek okupljaju u perifernom dijelu, kako se nositi s tim?

Odgovor:
Mogu li pitati kako se vaše ćelije miješaju? Je li pipetiranje ili trese kućna ploča? Ako je ovo potonje, a ako se uzdrma u krug, vrlo je vjerovatno da ćelije će biti bačene na periferni dio zbog centrifugalne sile, što rezultira manje ćelija u sredini. Više od četiri sedmice!
Evo dobrog načina: Prije nego što uzgajate semensku ploču, stavite kulturnu ploču u inkubator nekoliko sati zasićenosti, a zatim izvadite. Sila bi trebala biti svjetlost prilikom sadnje ćelija. Dodavanje polako omogućava da će se stanični ovjes teći u bunare ploče, a kultivirane ćelije u osnovi rastu. Ne zaboravite da se nikada ne trese sa šejkom ili će se vaše ćelije skupiti kao što ste rekli.
Što je manji promjer rupe plute kulture, to je očigledniji ovaj fenomen. Ovaj fenomen je neizbježan za tablice za 24 i 96 bunar, jer se tečnost pridržava zida tako da kulturna otopina u bunaru ne formira nivo tečnosti, ali periferija je visoka, baš kao i konkavno ogledalo. Međutim, kada se koristi ove dvije vrste otvora za otvor, nije moguće dodati dovoljnu količinu kulturnog rješenja zbog potrebe za dodatnom intervencijom, tako da će se ćelije pojaviti "kolekcija EDGE" zajedno sa kulturom. To ovisi o tome koji pokazatelji trebate promatrati. Ako je MTT, imunohistohemija će utjecati na rezultate zbog slojeva ćelija.
Prilikom probačenih ćelija obratite pažnju da ravnomjerno cijevitte da biste izbjegli grudice ćelija, a količina rješenja za kulturu u bunaru treba biti dovoljna. Općenito, dodajte dovoljno rješenja za kulturu prilikom inokuliranja i promijenite rješenje nakon dodavanja intervencije. Količina kulturnog rješenja dodana u intervencijsko rješenje jednaka je količini rješenja za kulturu u vrijeme inokulacije, u ovom slučaju, pojava "seta" Edge "bit će poboljšana, tako da biste i vi mogli pokušati.

Pitajte:
Ono što sam učinio bio je eksperiment formacije plaketa. Najbolje je širiti ćelije u jednoličnom sloju. Većina rupa je u redu kada se virus inokulira, a neki od njih nisu ujednačeni. Postoje velike razlike u ćelijskoj grupi. Želio bih vas pitati koja metoda koristite prilikom dodavanja ćelija?

Odgovor:
Kritično je pipeti da se ćelije pipe u jedno-ćeliji ovjes nakon probave! Provjerite je li broj ćelija u svakom bunar u skladu s dijeljenjem ploče!
Naravno, postoje i faktori prerade. Paralelizam između bunara je takođe vrlo važan. Na primjer, prilikom dodavanja lijeka, pomiješajte lijek nakon razrjeđivanja kako biste osigurali da je koncentracija svakog bunara dosljedna!
Nadalje, prilikom dodavanja ćelija i lijekova, testnu grupu i kontrolna grupa trebaju se dodati zauzvrat da bi se izbjegla razlika u gustoći ćelija i koncentracije lijekova uzrokovanih redoslijedom dodavanja uzoraka!

Pitajte:
Puhanje je već ujednačeno, ali davanje, 6 rupa i 24 rupe uvijek su pomalo neujednačene, a malo koncentrirano u sredini. Štaviše, očito je da se brojanje vrši, a nakon dana ili dvije, gustoća svake rupe je različita, što će utjecati na otkrivanje. Ima li dobar način?

Odgovor:
Ako koristite pasterov pipette, ne usisavajte previše vremena, jer će ćelije u pipetima automatski sudopati, često je broj ćelija u prvih nekoliko rupa velika, a suspenzija ćelije često je ujednačena, a tečnost će često biti ujednačena, a tečnost Slijedite rutu S-Oblik.
Ako koristite pipetu, savjeti trebaju se obraditi i ukloniti kako ne bi oštetilo ćelije, tako da se svaki put kada se tečnost poduzima dobro. Tačnije je dodavanje rupe s jednim na jedan sa vrhom. Ali i obratite pažnju na miješanje suspenzije.

Da biste postavili paralelnu grupu, n mora biti dovoljno velik (možete ga izračunati).

Nemojte se tresti nakon oblaganja, jer će se treseti uzrokovati da ćelije ugraditi prema centru. Najbolje je da se jednom daskam.

Porozne stanice za kulturu Yongyue medicina je uvijek smatrala kontrolu kvalitete kao život poduzeća i slijedio kontinuirano unapređenje konkurentnosti preduzeća. Kompanija se uvijek pridržava poduzetničkog duha pokoljavanja zakona i propisa, kao što je strog sa samodisciplijom, blažećim i odvažnim da preuzmu odgovornost kao standard u radu, održavanju i širenjem tržišta i odličnim uslugama i sastanku Potrebe kupaca u najvećoj mjeri. . Pobjeda pobjede sa kupcima je naš razvojni cilj. Yongyue Medical! Vaš pouzdan partner. Spremni smo s vama iskreno surađivati ​​s vama da stvorimo bolju budućnost.