Detaljno objašnjenje volatilizacije reagensa u PCR eksperimentima

Detaljno objašnjenje volatilizacije reagensa u PCR eksperimentima.

U PCR eksperimentu, nakon dodavanja reakcijskog sistema pažljivo prekrilimo poklopac i više puta potvrđuju da je poklopac zatvoren za izbjegavanje volatilizacije reagensa. Ali ponekad imamo i sumnje: potvrdili smo da je poklopac čvrsto zatvoren, ali nakon završetka eksperimenta, reagens će i dalje isparavati. Koji je razlog?

U stvari, volatilizacija reagensa jedan je od najčešćih problema u PCR eksperimentima, a postoji mnogo faktora koji utječu na provalizaciju reagensa.

Isparavanje se odnosi na to za vrijeme PCR eksperimenta, reakcijsko rješenje isparava na visokoj temperaturi, a zatim kondenzira na zid boca ili gornji poklopac za oblikovanje vodenih kapljica ili izravno prelijevanja iz zračnog jaza ili filma, što rezultira u promjeni koncentracije reakcijskog rješenja. Promjene, iznos reakcijskog rješenja se smanjio, a neki su čak isparavali na suhoće, što rezultira nevažećim eksperimentima.

1. Tlak vrućih poklopca, temperatura

U PCR eksperimentima obično zagrijavamo poklopac kako bismo spriječili kondenzaciju reagense pare. Temperatura grijanog poklopca obično je viša od onog reakcijskog rješenja za sprečavanje kondenzacije pare.

Termički biciklistički poklopci mogu se grubo podijeliti u sljedeće četiri vrste: ne podesivi poklopci za grijanje, podesivi poklopci za grijanje, adaptivni poklopci za grijanje i automatsko grijanje poklopca. Podesivi grijani poklopac sadrži kompresiju u čvrstog prsta. Ako se ne čvrsto steže, reagensi će isparavati. Isparavanje ivica može se minimizirati povećanjem pritiska na grijani poklopac. Ponekad pretilo može zabiti cijev i uviti dugme. U normalnim okolnostima, električni pametni poklopac za grijanje može automatski otkriti potrošni materijal različitih visina, automatski komprimirati potrošni materijal, a tlak je ujednačen i konstantan, na taj način smanjuju evaporativne i ručne pogreške i poboljšanje eksperimentalne tačnosti i ponovljivosti.

2. Deformacija potrošnog materijala

Za parni curenje većina ljudi misli da pritisak vrućeg poklopca nije dovoljan. Pritisak vrućeg poklopca je vrlo važan, ali to je samo jedan aspekt. U stvari, potrošni materijal su takođe vrlo važni.

PCR Orifice ploče obično se izrađuju od plastičnih materijala koji se šire i deformišu i nakon zagrijavanja. Stopa toplotne ekspanzije od PCR metalne baze koja se koristi za postavljanje PCR Orifice ploče izuzetno je niska, a PCR Orifice ploča ne može se normalno proširiti uz avion nakon termičkog širenja. Builge State čini gornji poklopac toplote u potpunosti kontaktirati površinu PCR Orifice ploče, što rezultira neujednačenom temperaturom i pritiskom, uzrokujući isparavanje reagensa na rubu PCR Orifice ploče i utječe na efekt otkrivanja PCR-a.

3. Potrošni materijal nisu čvrsto zapečaćeni

Zatezanje termalnog poklopca i potrošnog materijala ne znači da je PCR cijevni poklopac čvrsto zatvoren, a kvaliteta PCR bušotine je neujednačena. Visokokvalitetni potrošni materijal, površina mlaznice i poklopca su glatka, a brtva iza poklopca kutije je dobra, a nije lako curiti. Inferiorni potrošni materijal imaju neravne izljeve i radijalne linije, koje lako mogu prouzrokovati curenje ili čak sušenje.

Stoga, u PCR eksperimentima, pokušajte odabrati visokokvalitetni i prikladan potrošni materijal. Istovremeno, reakcijski sustav se može proširiti tako da bi se umanjio utjecaj isparavanja sistema na reakciju.